Roche羅氏 4707516001 羅氏熒光染料試劑盒

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Roche羅氏 熒光染料試劑盒-常備現(xiàn)貨

羅氏Roche總部位于瑞士巴塞爾，是全球在醫(yī)藥和診斷領(lǐng)域，致力于研究并處于 ling xian 地位之一的保健集團(tuán)。羅氏的診斷部門提供了獨(dú)yi無(wú)er的產(chǎn)品品種，為全shi界的研究人員、醫(yī)師、病人、醫(yī)院和實(shí)驗(yàn)室提供多樣化的創(chuàng)新測(cè)試產(chǎn)品及服務(wù)。羅氏診斷在全球有近19,000人員正致力于科研、發(fā)展、產(chǎn)品的市場(chǎng)運(yùn)作和服務(wù)以及一體化的解決方案。

Roche羅氏 4707516001 羅氏熒光染料試劑盒  5*1ml，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：Roche羅氏

產(chǎn)品貨號(hào)：4707516001

產(chǎn)品名稱：羅氏熒光染料試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：5*1ml

Roche羅氏 熒光染料試劑盒-常備現(xiàn)貨

Roche羅氏 4707516001 羅氏熒光染料試劑盒  5*1ml，產(chǎn)品說(shuō)明：

概述

LightCycler® 480 SYBR Green I Master 是一種用于 PCR 的單組分熱啟動(dòng)反應(yīng)混合物。它包含 FastStart Taq DNA 聚合酶和 DNA 雙鏈特異性 SYBR Green I 染料，用于 PCR 產(chǎn)物檢測(cè)和表征。由于該混合物作為易于使用的多合一主試劑提供，因此反應(yīng)設(shè)置只需要添加模板DNA和引物。該混合物可與不同類型的 DNA（例如基因組 DNA 或 cDNA）一起使用，適用于 LightCycler® 480 儀器上 96 孔板或 384 孔板的高通量應(yīng)用。

應(yīng)用

LightCycler® 480 SYBR Green I Master專為研究而設(shè)計(jì)。當(dāng)與 LightCycler® 480 系統(tǒng)一起使用時(shí)，該試劑盒非常適合熱啟動(dòng) PCR 應(yīng)用。結(jié)合 LightCycler® 480 系統(tǒng)和合適的 PCR 引物，該試劑盒可以fei常靈敏地檢測(cè)和定量確定的 DNA 序列。該試劑盒還可用于執(zhí)行兩步 RT-PCR。它也可以與熱不穩(wěn)定的尿mi啶-DNA糖基化酶一起使用，以防止PCR過(guò)程中的殘留污染。

原則上，該試劑盒可用于擴(kuò)增和檢測(cè)任何DNA或cDNA靶標(biāo)。

原則

LightCycler 480 SYBR Green I Master 是一種即用型反應(yīng)混合物，專為在 LightCycler®® 480 儀器上應(yīng)用 SYBR Green I 檢測(cè)格式而設(shè)計(jì)。它用于在 96 或 384 多孔板中進(jìn)行熱啟動(dòng) PCR。熱啟動(dòng)PCR已被證明通過(guò)在反應(yīng)開始時(shí)最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的形成，顯著提高PCR的特異性和靈敏度[Chou Q等人，1992和Kellogg DE，等人，1994]。

FastStart Taq DNA 聚合酶是一種化學(xué)修飾形式的熱穩(wěn)定重組 Taq DNA 聚合酶，在高達(dá) 75°C 的溫度下沒(méi)有活性。 該酶僅在高溫下具有活性，其中引物不再非特異性結(jié)合。在循環(huán)開始之前，酶在單個(gè)預(yù)孵育步驟（95°C，5 - 10分鐘）中wan全激活（通過(guò)去除封閉基團(tuán)）。激活不需要其他熱啟動(dòng)技術(shù)典型的額外處理步驟。

PCR產(chǎn)物的產(chǎn)生可以通過(guò)測(cè)量SYBR綠I熒光信號(hào)來(lái)檢測(cè)。SYBR Green I插入DNA螺旋（5）。在溶液中，未結(jié)合的染料表現(xiàn)出很少的熒光;然而，熒光（波長(zhǎng)，530 nm）在DNA結(jié)合時(shí)大大增強(qiáng)。因此，在PCR過(guò)程中，SYBR Green I熒光的增加與產(chǎn)生的雙鏈DNA量成正比。由于SYBR Green I染料非常穩(wěn)定（在30個(gè)擴(kuò)增循環(huán)中只有6%的活性損失），并且LightCycler® 480儀器的光學(xué)濾光片組與激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)相匹配，因此它是測(cè)量總DNA的shou選試劑。

在光循環(huán)儀® 480系統(tǒng)上進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR期間，使用SYBR Green I進(jìn)行DNA檢測(cè)的基本步驟是：

1.  在擴(kuò)增開始時(shí)，反應(yīng)混合物包含變性DNA、引物和染料。未結(jié)合的染料分子發(fā)出微弱的熒光，產(chǎn)生最小的背景熒光信號(hào)，在計(jì)算機(jī)分析過(guò)程中會(huì)減去該信號(hào)。

2.  引物退火后，一些染料分子可以與雙鏈結(jié)合。DNA結(jié)合導(dǎo)致SYBR Green I分子在激發(fā)時(shí)發(fā)光的急劇增加。

3.  在伸長(zhǎng)過(guò)程中，越來(lái)越多的染料分子與新合成的DNA結(jié)合。如果連續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，則可以實(shí)時(shí)觀察熒光的增加。在下一個(gè)加熱循環(huán)的DNA變性后，染料分子被釋放并且熒光信號(hào)下降。

4.  在每個(gè)PCR循環(huán)的伸長(zhǎng)步驟結(jié)束時(shí)進(jìn)行熒光測(cè)量，以監(jiān)測(cè)擴(kuò)增DNA量的增加。

為了證明只有您想要的PCR產(chǎn)物被擴(kuò)增，您可以在PCR后進(jìn)行熔解曲線分析。在熔解曲線分析中，反應(yīng)混合物緩慢加熱至97°C，這導(dǎo)致雙鏈DNA熔解并相應(yīng)降低SYBR Green I熒光。儀器持續(xù)監(jiān)測(cè)這種熒光降低，并將其顯示為熔解峰。每個(gè)熔解峰代表特定DNA產(chǎn)物的特征解鏈溫度（Tm）（其中DNA為50%雙鏈和50%單鏈）。決定dsDNA的Tm的最重要因素是該片段的長(zhǎng)度和GC含量。如果PCR僅產(chǎn)生一個(gè)擴(kuò)增子，則熔解曲線分析將僅顯示一個(gè)熔解峰。如果存在引物二聚體或其他非特異性產(chǎn)物，它們將顯示為額外的熔點(diǎn)峰。因此，檢查PCR產(chǎn)物的Tm可以與在凝膠電泳中按長(zhǎng)度分析PCR產(chǎn)物進(jìn)行比較。

其他說(shuō)明

僅用于生命科學(xué)研究。不適用于診斷程序。

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

4707516001 羅氏熒光染料試劑盒  5*1ml